高速西方點墨反應儀 Western Q 之簡易操作流程【訂貨資料 WTQ101/ WTQ102】【萊恩生物科技有限公司04-25239639】

Western Q 之簡易操作流程 (高速西方點墨反應儀) WTQ101

高速西方點墨反應儀 Western Q 跟傳統的方式比較，時間從原有的4小時縮短至40分。不論是定量表現、再現性及靈敏度，測試結果都與原先傳統的方法相同或更具優勢。

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	データシート
		※ 4℃ o/n の抗体もご使用可能です

高速免疫染色装置 Western Q® は、従来振とうで4時間以上かかっていたウエスタンブロッティングの免疫染色の工程*を、わずか40分に短縮します。 従来法と同等以上のイメージ / 高い定量性・再現性・感度 従来法 240 分 Western Q 循環パルス法(A) 40 分 Western Q 循環パルス法(B) 40 分 定量性、再現性、感度といった結果のクオリティは従来法と同等以上です。
*	タンパク質がブロッティングされたメンブレンを、ブロッキングに始まり、一次抗体反応、二次抗体反応、洗浄する全工程。

A. 裝置架設

1) 運轉功能確認

首先連接機體與電源供應器，並準備一廢液瓶。將排放管開口置入廢液瓶中，並加入適量二次水於機體上方拖盤內。打開電源，按下邦浦啟動鍵(綠色)，檢查二次水是否經邦浦吸入且經排放管流入廢液瓶中。此時可同時檢查液體流速是否可藉邦浦速度調整鈕進行調整，以及按下脈衝按鈕（黃色）確認邦浦是否可間些性做動。

2) 安裝membrane

首先請先將孔狀金屬板及尼龍網片以二次水沾濕，並由下往上依序將孔狀金屬板及尼龍網片置於機體上方拖盤內，將以清洗溶液沾濕之membrane以蛋白質面朝上之方向放置於尼龍網片中央，再將適當開口(75x 60m m)之矽膠蓋片放置於membrane之上。將排放管開口置入廢液瓶中，按下邦浦啟動鍵（綠色）以去除多餘之溶液。此時在確認溶液排空後矽膠蓋片是否緊密吸附於尼龍網片上。若確認正常，最後加入數滴清洗溶液並觀察溶液是否可完全經membrane上之孔洞快速流出。

3) 安裝排放管

如圖所示，將支撐器插入機後方，並將排放管固定於支撐器上，使排放管末段超出支撐器卡榫。

B. 免疫染色流程

1) 封鎖（Blocking, 5分鐘）

首先將邦浦速度調整鈕設定至2，並且加入8毫升封鎖溶液在membrane上，按下邦浦啟動鍵使溶液進行循環反應，並確認此一循環反應過程中封鎖溶液能覆蓋整張membrane，5分鐘後將排放管開口置入廢液瓶中，以去除多餘之封鎖溶液。

2) 一級抗體反應（15分鐘）

首先按下脈衝按鈕並將邦浦速度調整鈕設定至2，並且加入8毫升一級抗體溶液在membrane上，按下邦浦啟動鍵使溶液進行脈衝式循環反應，15分鐘後將排放管開口置入廢液瓶中，去除多餘之一級抗體溶液（若需重複使用一級抗體溶液，只需將排放管開口置入乾淨離心管中進行回收即可）。

3) 二級抗體反應（15分鐘）

如同上述一級抗體反應步驟，加入8毫升二級抗體溶液在membrane上，按下邦浦啟動鍵及脈衝按鈕使溶液進行脈衝式循環反應，15分鐘後將排放管開口置入廢液瓶中，去除多餘之二級抗體溶液。

4) 清洗（Washing, 5分鐘）

將排放管開口置入廢液瓶中並移除機身上之支撐器，將清洗套件放置於矽膠蓋片上，並加壓使其黏附於矽膠蓋片上。將邦浦速度調整鈕設定至3，並且緩慢加入100毫升清洗溶液在membrane上，在所有清洗溶液流出機體至廢液瓶後將membrane取出浸泡於清洗溶液中等待訊號偵測。

高速免疫染色装置 Western Q® の特徴 　 1. Immunostaining by Western Q Circulated Pulse Method (Standard Protocol)The following data are immunostaining of western blotting using various antibodies as primary antibodies. Two times dilution series of total protein from 10mg to 0.625mg derived from IGF-1 stimulated (50ng/ml, 5minutes) mouse cultured cell, P19, was blotted on PVDF membrane. Shaking in antibody solution was conducted for traditional method, and Circulated Pulse Method was conducted for Western Q. Same concentrations of antibodies (recommendedby manufacturers) were used for traditional shaking method and for Western Q Circulated Pulse Method. A) β-Actin (C4) (Santa Cruz) 1/3000 dilution Traditional Method: 4 hours Western Q Circulated PulseMethod: 40minutes exposure: 40 seconds exposure: 40 seconds Traditional Method: Blocking 1hour (5% skim milk), Primary antibody1hour, Secondary antibody 1hour, Washing total 60 minutes, Total 4 hoursWestern Q Standard Protocol: Blocking 5 minutes (0.5% skim milk), Primary antibody 15minutes, Secondary antibody 15minutes, Washing 5 minutes, Total 40minutes Secondary antibody: Polyclonal goat anti-mouse immunoglobulins/HRP (Dako), 1/7500 dilutionECL (GE Healthcare) was used for chemiluminescence reaction. Exposed on X ray film B) Phospho-p44/42 MAPK (Thr202/Tyr204) (E10) Mouse mAb（Cell Signaling） 1/2000 dilution 4℃ overnight reaction is recommended by the manufacturer Traditional Method: Primary antibody 16 hours Western Q CirculatedPulse Method: 40 minutes exposure 2.5 minutes exposure 10 minutes Traditional Method: Blocking 1hour (5% skim milk), Primary antibody16 hours, Secondary antibody 1hour, Washing total 60 minutes, Total18 hours Western Q Standard Protocol: Blocking 5 minutes (0.5% skim milk), Primary antibody 15minutes, Secondary antibody 15minutes,Washing 5 minutes, Total 40minutes Secondary antibody: Polyclonal goat anti-mouse immunoglobulins/HRP (Dako), 1/7500dilution ECL Plus (GE Healthcare) was used for chemiluminescence reaction. Exposed on X ray film C) Phospho-Akt (Ser473) (Cell Signaling) 1/1000 dilution 4℃ overnight reaction is recommended by the manufacturer Traditional Method: Primary antibody 16 hours Western Q Circulated Pulse Method: 85 minutes exposure: 5 minutes exposure: 15 minutes Traditional Method: Blocking 1hour (5% skim milk), Primary antibody 16 hours ( 4℃ ), Secondaryantibody 1hour, Washing total 60 minutes, Total 18 hours Western Q modified protocol: Blocking 5 minutes (0.5% skim milk), Primary antibody 60 minutes, Secondary antibody 15minutes, Washing 5 minutes, Total 85minutes Secondary antibody: Polyclonal swine anti-rabbit IgG/HRP (Dako), 1/7500dilution ECL Plus (GE Healthcare) was used for chemiluminescence reaction. Exposed on X ray film Reaction speed by Western Q (Circulated Pulse Method) is several todozen times higher than one by traditional shaking method.☞ Protocol adjustment such as increasing time or raising concentration may be necessary for immunostaining which requires overnight reaction by traditional method because of antibodies or samples 簡単操作 ４０分 標準プロトコール（循環パルス法）で４０分の操作で免疫染色が完了します。抗体濃度・プロトコールによっては３０分程度に短縮可能です。振とうでオーバーナイトが必要な抗体では、４０分以上かかることがあります。 用途に合わせた２種類のプロトコール 高感度ハイクオリティを実現する「循環パルス法」と、複数の抗体反応を簡易的に行うための「インキュベーション法」の２種類の基本プロトコールを準備しました。 ハイクオリティな結果 循環パルス法では最適化されたフローコントロールにより、高い定量性・再現性・感度を実現します。 → 詳細は データシート をご参照ください。 抗体濃度の最適化不要 抗体濃度は基本的に従来法と同様で結構です。多くの場合、抗体メーカーの推奨濃度で反応できます。 必要な溶液量はワイドゲル（140×80mm）15ml、ミニゲル（80×80mm）8ml 、80×40mmでは4mlとなります。 ゲルに合わせたコンパクトボディ 狭いスペースでも利用でき、移動も楽に行えます。 製品リーフレット（PDF） のダウンロード ご利用者の感想 もご覧いただけます。 Click to download Leaflet on Western Q and Datasheet on Western Q 従来法と同等以上のイメージ / 高い定量性・再現性・感度 従来法 240 分 Western Q 循環パルス法(A) 40 分 Western Q 循環パルス法(B) 40 分 lane1～5： ヒト培養細胞由来全タンパクを10μgから0.625μgまで2倍希釈系列をブロッティング ブロッキング： 従来法は5%スキムミルク、Western Q 循環パルス法は0.5%スキムミルク使用 一次抗体： Mouse monoclonal β-Actin (C4) （Santa Cruz）、1/3000希釈 二次抗体： Polyclonal goat anti-mouse immunogloblins/HRP (Dako)、1/7500希釈 ECL（GE Healthcare）で反応させた後、X線フィルムに40秒間露光 　同じ条件での比較 Western Q 循環パルス法はA, B 2回の反復実験 Western Q® を用いた高速免疫染色の原理 Western Q を用いた方法では、抗体溶液をメンブレンの微細孔内部に継続的に流し通過させることにより抗原と抗体の会合を促進します。さらにパルスフローにより分子の安定的な結合を促進し、短時間で高いシグナル強度を実現します。ポンプにより溶液を循環させるため一定量の抗体溶液で抗原抗体反応を効率よく行うことが可能になりました。 　循環パルス法を用いた標準操作 メンブレンをセットし、メンブレンカバーを重ね合わせます。 ブロッキング溶液 8ml をメンブレン上に満たし、5 分間循環させた後、排出。 一次抗体溶液を 8ml メンブレン上に満たし、15 分間パルスフローで循環させた後、排出。 二次抗体溶液 8ml を加え、15分間パルスフローで循環させた後、排出。 洗浄ユニットをセットし、洗浄溶液を 100ml 加え、すぐ排出。（約5分） メンブレンを取り出し、軽く洗浄溶液で濯ぎ、化学発光試薬で検出。 簡単操作、４０分！ Western Q® 仕様 型式 WTQ101 （ミニゲル対応） WTQ102 （ワイドゲル対応） 外形寸法（チューブ固定具装着時） 150(W)×150(D)×157(H) mm 190(W)×150(D)×157(H) mm 重量 1.6 kg 1.7 kg 最大メンブレンサイズ 90×90 mm 140×90 mm 必要抗体溶液量 8ml （90×90mmメンブレン） 15ml （140×90mmメンブレン） ポンプ速度 5～40ml/分