西方轉漬分析-ECL【市售ECL主要市場比較】
1. PerkinElmer
市面上大部份ECL的等級是nanogram，PerkinElmer Lightning plus靈敏度為1-10 picogram，包裝規格如下: 170mlx4 特價~7000元 (~10
元/ml)
元/ml)
Western Blot Chemiluminescence Reagent Plus
(~10元/ml)
目錄號碼
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包裝
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可使用面積
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NEL104
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2 x 170 ml
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2,500 cm2 membrane
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NEL105
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4 x170 ml
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5,000 cm2 membrane
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2. Pierce
SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate
靈敏度為picogram 250mlx2 特價~7000元 (~14元/ml) 第二件半價 (~10元/ml)SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate
(~10~14元/ml)
T-PRO新一代高靈敏度冷光試劑ECL
(一) fetagram ECL，靈敏度接近fg (靈敏度接近millipore ECL)
200mlx2 特價3500元
(一) Picogram ECL，靈敏度接近pg (靈敏度高於Pierce ECL, 與PerkinElmer )
200mlx2 特價2500元
(~6.25元/ml)-->picogram等級
.jpg)
(~8.75元/ml)-->fetogram等級
T-Pro LumiFast Chemiluminescence Detection Kit, 貨號#JT96-K001S
400ml特價2500
冷光試劑介紹:
T-Pro LumiFast Chemiluminescence Detection Kit & T-Pro LumiFast Plus Chemiluminescence Detection Kit 為一方便用於偵測直接或間接帶有HRP的Western blotting，Southern 或 Northern化學發光之試劑套組。在有過氧化氫存在的情形下，Horseradish peroxidase (HRP)會催化環狀二酰基酰肼(cyclic diacylhydrazides)的氧化，像是發光胺(luminol)。氧化當下，發光胺(luminol)的中間產物處於激發態，此產物藉由發光的方式衰退為基態。強化劑可增強發光的能量。利用此方法可以藉由直接或間接標定有HRP的抗體/鏈親和素(streptavidin)進而偵測特殊抗原或是核酸序列。
操作流程：
1. 將T-Pro LumiFast Chemiluminescence Detection Kit & T-Pro LumiFast Plus Chemiluminescence Detection Kit 中的試劑A及試劑B等體積混合至足夠蓋過membrane的使用量(平均用量最少為0.1ml/cm2)。於室溫使此混合試劑均勻混合作用1-2分鐘。
2. 將membrane上過量的緩衝液倒掉，但要保持轉漬膜的濕潤。加入步驟1混合好的試劑於轉漬膜上，在室溫下作用1-2分鐘。
3. 將步驟2過多的混合試劑倒掉，且將轉漬膜置於兩層保鮮膜中間或用兩片透明塑膠片密封，注意不可以有氣泡，並將轉漬膜吸附蛋白正面朝上，同時轉漬膜請勿過濕。
4. 將步驟3轉漬膜置入底片夾中。置入底片，要避光或是使用紅光。曝光約30至90秒。
5. 置入新的底片前，請先將原先片夾中的底片取出，並將底片放入顯影劑中。
6. 第二張底片的曝光時間可依據第一張的時間做調整。
7. 如果訊號過強，可在加入呈色劑15~30分鐘後再進行壓片，或作其他時間的調整。
注意事項：
1. 轉漬膜在接上一級抗體後須保持濕潤，不能乾掉。
2. 請在壓片前再配製化學發光試劑，配製量足夠覆蓋轉漬膜即可，勿將使用過混合試劑重複或混合使用。
3. 請使用乾淨微量吸管(Tip)並單一取用每種試劑，勿重複多次試用避免污染。
4. 除了取用底片、壓片曝光及洗片處理外，其他步驟可不必在暗室中操作。
5. 壓片後轉漬膜可經由T-Pro Western Blot Stripping Reagent (JB11-K002) 洗去原有抗體後，重複再次使用。
【供應廠商】萊恩生物科技有限公司
【公司電話】04-2523-9639
【業務專員】陳俊豪 0937-229803
【電子信箱】biolion0819@gmail.com
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