萊恩生物科技有限公司-Western Blot Signal enhancer試劑，增強抗體/抗原訊號，節省抗體用量及時間。代理SBA、TREVIGEN、INNOVA BIOSCIENCES等試劑

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萊恩生物科技有限公司，突破新技術，改良式Western Blot Signal enhancer，能有效”增強”抗體”訊號”， 節省”抗體用量”，縮短抗體反應時間。

簡介：

在現行Western Blot 的相關實驗中，抗體的重複再利用已是實驗室普遍的現象，為了有效的使用抗體、節省實驗資源及加速實驗進度等多種目地。T-Pro Western Blot Enhancer Kit成功開發出，能有效的在短時間完成Western

Blot或有效節省抗體用量，又不需回收抗體重複使用，造成抗體效能變差，以及當抗體訊號微弱不清稀時，可增強抗體訊號10倍~1000倍訊號強度。建議使用者之轉印膜的材質請使用硝化纖維(NC)會有較佳結果，請勿使用PVDF

之轉印膜的材質會有較高的背景值影響結果。

產品特色：

T-Pro Western Blot Enhancer Kit有以下幾個優點：

• 對於量少或取得不易的實驗樣品可進行最有效的利用，節省實驗資源。

• 增強，對於抗體訊號微弱不清稀時，可增強抗體訊號10~1000倍訊號強度。

• 省時，依原抗體供應商建議操作用量使用抗體時，可縮短原有抗體操作時間2~4倍。但無法同時降低抗體用量。

• 省錢，依原抗體供應商建議操作用量使用抗體時，可減少抗體用量2~10倍，但無法同時縮短原有抗體操作時間。

操作指南：

T-Pro WBE Solution A可直接做為一抗稀釋液使用，用於增強一抗與抗原間結合力及接合量。

T-Pro WBE Solution B可直接做為二抗稀釋液使用，用於增強一抗與二抗間結合力及接合量。

用於增強抗體訊號時：

一抗與T-Pro WBE Solution A建議使用比例

(200~500X)，如：ㄧ抗原抗體供應商建議稀釋濃度使用1,000X，則取一抗5μl (0.8μg~1.2μg/μl)加入稀釋液( T-Pro WBE Solution A) 1,000μl混合反應15分鐘，再加入PBST或TBST 3,995μl混合，置入轉印膜反應-二抗與T-Pro WBE Solution B建議使用比例(200~1000X)，如：二抗原抗體供應商建議稀釋濃度使用5,000X，則取二抗1μl (0.8μg~1.2μg/μl)加入稀釋液( T-Pro WBE Solution A) 1,000μl混合反應15分鐘，再加入PBST或TBST 3,999μl混合，置入轉印膜反應-

用於減少抗體用量時：(一抗減少10倍用量)

一抗與T-Pro WBE Solution A建議使用比例(200~500X)，如：ㄧ抗原抗體供應商建議稀釋濃度使用1,000X，則取一抗0.5μl (0.8 μg ~1.2 μg/μl )加入稀釋液( T-Pro WBE Solution A) 250μl混合反應15分鐘，再加入PBST或TBST 4,750μl混合，置入轉印膜反應-二抗與T-Pro WBE Solution B建議使用比例(200~1000X)，如：二抗原抗體供應商建議稀釋濃度使用10,000X，則取二抗1μl (0.8μg~1.2μg/μl)加入稀釋液( T-Pro WBE Solution A) 1,000μl混合反應15分鐘，再加入PBST或TBST 8,999μl混合，置入轉印膜反應-

注意：

ECL Kit 建議請使用T-Pro LumiFast Plus ECL Kit

轉印膜建議請使用Nitrocellulose (NC)

儲藏條件：

一般情形下，可儲存於2~ 8℃，可保存12個月。

 

【供應廠商】萊恩生物科技有限公司

【公司電話】04-2523-9639

【業務專員】陳俊豪 0937-229803

【電子信箱】biolion0819@gmail.com

 

Prestain Protein marker -萊恩生物科技有限公司。特價990元/250ul。-分子量位置與Fermentas prestain protein marder #SM0671接近

T-Pro Prestained Protein Ladder是一種擁有三種不同顏色及十種不同分子量之蛋白質標識，其所能標示之分子量範圍從10到180 kDa，其中含有75 kDa的紅色條紋標識及25 kDa的綠色條紋標識。本產品乃是專門設計用於監測蛋白質電泳中蛋白質分離之過程及評估進行西方點墨法後，蛋白質轉移至轉漬膜 (PVDF, nylon, or nitrocellulose)之效率和對所偵測蛋白質之分子量做最後評估時所用。本產品使用時相當方便，無須任何處理及加熱步驟即可立即使用。

Contents：

本產品中之十種不同蛋白質之濃度皆介於0.2~ 0.4 m g/ml 之間，且溶於含有20mM Tris-phosphate (pH 7.5), 2% SDS, 1m M 2-Mercaptoethanol, 3.6M urea, and 15% glycerol之溶液中。

Quality Control：

本產品出品前接經由完整之SDS- polyacrylamide 電泳及西方點墨法測試。

Storage：

本產品可穩定儲存於4 0C中 3個月或是於 -200C 24個月。

簡介：

•本產品標識條紋清晰且分子量穩定。

•本產品中含有兩條彩色條紋標識-分別是75 kDa的紅色條紋及25 kDa的綠色條紋。

•不需煮沸可立即使用。

•使用15-well or 10-well mini-gel 進行電泳時，每次使用3 μl or 5 μl 即可得到清晰的實驗結果。

•進行西方點墨法時，每次使用2-3μl即可得到清晰的實驗結果。

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SBA(SouthernBiotech)代理-萊恩生物科技有限公司。SBA豬，雞，兔子，貓CD markers。高品質二抗(人、小鼠、大鼠、山羊、綿羊、倉鼠)。各式Isotype control。

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美國SBA（Southern Biotechnology Associates, Inc.）公司建於1982年，由美國伯明罕的阿拉巴馬大學（UAB）的Dr. Max Cooper細胞免疫學實驗室的科學家創建。SBA致力於高品質、高親和純化的二抗的生產、純化和標記。同時，SBA還提供各種親和純化的多克隆和單克隆抗體，其中包括：螢光素和酶標記物，低內毒素/不含疊氮化物（LE/AF）製劑，F(ab)和F(ab')2，此外還有純化的免疫球蛋白和膠原質。

原廠連結: www.southernbiotech.com
 

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T-Pro LumiFast Chemiluminescence Detection Kit & T-Pro LumiFast Plus Chemiluminescence Detection Kit

T-Pro LumiFast Chemiluminescence Detection Kit & T-Pro LumiFast Plus Chemiluminescence Detection Kit 為一方便用於偵測直接或間接帶有HRP的Western blotting，Southern 或 Northern化學發光之試劑套組。在有過氧化氫存在的情形下，Horseradish peroxidase (HRP)會催化環狀二?基??(cyclic diacylhydrazides)的氧化，像是發光胺(luminol)。氧化當下，發光胺(luminol)的中間產物處於激發態，此產物藉由發光的方式衰退為基態。強化劑可增強發光的能量。利用此方法可以藉由直接或間接標定有HRP的抗體/鏈親和素(streptavidin)進而偵測特殊抗原或是核酸序列。

操作流程：

1.將T-Pro LumiFast Chemiluminescence Detection Kit & T-Pro LumiFast Plus Chemiluminescence Detection Kit 中的試劑A及試劑B等體積混合至足夠蓋過membrane的使用量(平均用量最少為0.1ml/cm2)。於室溫使此混合試劑均勻混合作用1-2分鐘。

2.將membrane上過量的緩衝液倒掉，但要保持轉漬膜的濕潤。加入步驟1混合好的試劑於轉漬膜上，在室溫下作用1-2分鐘。

3.將步驟2過多的混合試劑倒掉，且將轉漬膜置於兩層保鮮膜中間或用兩片透明塑膠片密封，注意不可以有氣泡，並將轉漬膜吸附蛋白正面朝上，同時轉漬膜請勿過濕。

4.將步驟3轉漬膜置入底片夾中。置入底片，要避光或是使用紅光。曝光約30至90秒。

5.置入新的底片前，請先將原先片夾中的底片取出，並將底片放入顯影劑中。

6.第二張底片的曝光時間可依據第一張的時間做調整。

7.如果訊號過強，可在加入呈色劑15~30分鐘後再進行壓片，或作其他時間的調整。

注意事項：

1.轉漬膜在接上一級抗體後須保持濕潤，不能乾掉。

2.請在壓片前再配製化學發光試劑，配製量足夠覆蓋轉漬膜即可，勿將使用過混合試劑重複或混合使用。

3.請使用乾淨微量吸管(Tip)並單一取用每種試劑，勿重複多次試用避免污染。

4.除了取用底片、壓片曝光及洗片處理外，其他步驟可不必在暗室中操作。

5.壓片後轉漬膜可經由T-Pro Western Blot Stripping Reagent (JB11-K002) 洗去原有抗體後，重複再次使用。

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“不需加熱” Stripping Buffer 只要”5分鐘” 將一抗及二抗去除，與一般抗體去除試劑最大的不同點, 就是”不需加熱”處理，室溫下均勻反應。T-Pro代理商-萊恩生物科技有限公司。

T-Pro Western Blot Stripping Reagent

T-Pro Western Blot Stripping Reagent II

T-Pro Western Blot Stripping Reagent III

 

高效能的5 mins stripping buffer, 只要”5分鐘”將一抗及二抗去除，與一般抗體去除試劑最大的不同點, 就是”不需加熱”處理，室溫下均勻反應5min, 隨取隨用。即使是高親和力的抗體, 也只要5~ 10m in哦!!

方法

Wash the wet membrane in the stripping buffer for 3 min

incubate the membrane at RT under agitation. Wash

the membrane for 2X3min in PBS-T or TBS-T at RT.

 

Western Blot Stripping Buffer

Introduction:

Stripping Reagent for Western Blot is formulated to effectively remove the antibodies from Western blot that have been developed with chemiluminescence. The membrane can be nitrocellulose or PVDF/nylon. The stripped membrane can be re-probing for the Western Blot and for mass spectrometry.

Reuse of blots offers many advantages：

• Effective use of sample that is available in limited amounts.

• Comparison of images obtained with different antibodies in the same blot.

• Confirmation of results with the same or different antibodies.

• It is simple, more economical and less time consuming to reprobe and mass spectrometry

Features：

- Strip blot in 5~15 minutes.

- Incubation at room temperature.

- No stench smelling and without addition of 2-mercaptoethanol or its analogs.

- A propriety formulation with an eco-friendly and non-hazardous organic solvent (with light odor) and can completely disassociate the bound antibodies

Protocol of T-Pro Western Blot Stripping Reagent I

1. Pour 10 ml stripping reagent to a clean container and put the membrane in the container. Make sure that the membrane is fully submerged with the stripping buffer.

2. Incubate the membrane in stripping reagent at room temperature for 3 minutes with strong agitation for twice. For the high affinity antibodies, the incubation time need to be optimized, 5~10 minutes stripping at 37℃ is usually sufficient for most of antibodies.

3. Wash the membrane twice by using TBS-T or PBS-T at room temperature in large volumes (e.g. 100 ml) for 3 minutes.

Stripping working time 3 min，Stripping Reagent store RT。

T-Pro Western Blot Stripping Reagent II

1. Pour 10 ml stripping reagent to a clean container and put the membrane in the container. Make sure that the membrane is fully submerged with the stripping buffer.

2. Incubate the membrane in stripping reagent at room temperature for 10~15 minutes with strong agitation for twice. For the high affinity antibodies, the incubation time need to be optimized, 15~20 minutes stripping at 37℃ is usually sufficient for most of antibodies.

3. Wash the membrane twice by using TBS-T or PBS-T at room temperature in large volumes (e.g. 100 ml) for 3 minutes.

Stripping working time 10 min，Stripping Reagent store RT。

T-Pro Western Blot Stripping Reagent III

1. Pour 10 ml stripping reagent to a clean container and put the membrane in the container. Make sure that the membrane is fully submerged with the stripping buffer.

2. Incubate the membrane in stripping reagent at room temperature for 30 minutes. For the high affinity antibodies, the incubation condition need to be optimized, stripping at 65℃ is usually sufficient for most of antibodies.

3. Wash the membrane three times by using TBS-T or PBS-T at room temperature in large volumes (e.g. 100 ml) for 10 minutes.

Stripping working time 30 min，Stripping Reagent store RT。

• T-Pro Stripping Reagent (en).pdf
• T-Pro Stripping Reagent II (en).pdf
• T-Pro Stripping Reagent III (en).pdf

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高速西方點墨反應儀 Western Q 之簡易操作流程【訂貨資料 WTQ101/ WTQ102】【萊恩生物科技有限公司04-25239639】

Western Q 之簡易操作流程 (高速西方點墨反應儀) WTQ101

高速西方點墨反應儀 Western Q 跟傳統的方式比較，時間從原有的4小時縮短至40分。不論是定量表現、再現性及靈敏度，測試結果都與原先傳統的方法相同或更具優勢。

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	データシート
		※ 4℃ o/n の抗体もご使用可能です

高速免疫染色装置 Western Q® は、従来振とうで4時間以上かかっていたウエスタンブロッティングの免疫染色の工程*を、わずか40分に短縮します。 従来法と同等以上のイメージ / 高い定量性・再現性・感度 従来法 240 分 Western Q 循環パルス法(A) 40 分 Western Q 循環パルス法(B) 40 分 定量性、再現性、感度といった結果のクオリティは従来法と同等以上です。
*	タンパク質がブロッティングされたメンブレンを、ブロッキングに始まり、一次抗体反応、二次抗体反応、洗浄する全工程。

A. 裝置架設

1) 運轉功能確認

首先連接機體與電源供應器，並準備一廢液瓶。將排放管開口置入廢液瓶中，並加入適量二次水於機體上方拖盤內。打開電源，按下邦浦啟動鍵(綠色)，檢查二次水是否經邦浦吸入且經排放管流入廢液瓶中。此時可同時檢查液體流速是否可藉邦浦速度調整鈕進行調整，以及按下脈衝按鈕（黃色）確認邦浦是否可間些性做動。

2) 安裝membrane

首先請先將孔狀金屬板及尼龍網片以二次水沾濕，並由下往上依序將孔狀金屬板及尼龍網片置於機體上方拖盤內，將以清洗溶液沾濕之membrane以蛋白質面朝上之方向放置於尼龍網片中央，再將適當開口(75x 60m m)之矽膠蓋片放置於membrane之上。將排放管開口置入廢液瓶中，按下邦浦啟動鍵（綠色）以去除多餘之溶液。此時在確認溶液排空後矽膠蓋片是否緊密吸附於尼龍網片上。若確認正常，最後加入數滴清洗溶液並觀察溶液是否可完全經membrane上之孔洞快速流出。

3) 安裝排放管

如圖所示，將支撐器插入機後方，並將排放管固定於支撐器上，使排放管末段超出支撐器卡榫。

B. 免疫染色流程

1) 封鎖（Blocking, 5分鐘）

首先將邦浦速度調整鈕設定至2，並且加入8毫升封鎖溶液在membrane上，按下邦浦啟動鍵使溶液進行循環反應，並確認此一循環反應過程中封鎖溶液能覆蓋整張membrane，5分鐘後將排放管開口置入廢液瓶中，以去除多餘之封鎖溶液。

2) 一級抗體反應（15分鐘）

首先按下脈衝按鈕並將邦浦速度調整鈕設定至2，並且加入8毫升一級抗體溶液在membrane上，按下邦浦啟動鍵使溶液進行脈衝式循環反應，15分鐘後將排放管開口置入廢液瓶中，去除多餘之一級抗體溶液（若需重複使用一級抗體溶液，只需將排放管開口置入乾淨離心管中進行回收即可）。

3) 二級抗體反應（15分鐘）

如同上述一級抗體反應步驟，加入8毫升二級抗體溶液在membrane上，按下邦浦啟動鍵及脈衝按鈕使溶液進行脈衝式循環反應，15分鐘後將排放管開口置入廢液瓶中，去除多餘之二級抗體溶液。

4) 清洗（Washing, 5分鐘）

將排放管開口置入廢液瓶中並移除機身上之支撐器，將清洗套件放置於矽膠蓋片上，並加壓使其黏附於矽膠蓋片上。將邦浦速度調整鈕設定至3，並且緩慢加入100毫升清洗溶液在membrane上，在所有清洗溶液流出機體至廢液瓶後將membrane取出浸泡於清洗溶液中等待訊號偵測。

高速免疫染色装置 Western Q® の特徴 　 1. Immunostaining by Western Q Circulated Pulse Method (Standard Protocol)The following data are immunostaining of western blotting using various antibodies as primary antibodies. Two times dilution series of total protein from 10mg to 0.625mg derived from IGF-1 stimulated (50ng/ml, 5minutes) mouse cultured cell, P19, was blotted on PVDF membrane. Shaking in antibody solution was conducted for traditional method, and Circulated Pulse Method was conducted for Western Q. Same concentrations of antibodies (recommendedby manufacturers) were used for traditional shaking method and for Western Q Circulated Pulse Method. A) β-Actin (C4) (Santa Cruz) 1/3000 dilution Traditional Method: 4 hours Western Q Circulated PulseMethod: 40minutes exposure: 40 seconds exposure: 40 seconds Traditional Method: Blocking 1hour (5% skim milk), Primary antibody1hour, Secondary antibody 1hour, Washing total 60 minutes, Total 4 hoursWestern Q Standard Protocol: Blocking 5 minutes (0.5% skim milk), Primary antibody 15minutes, Secondary antibody 15minutes, Washing 5 minutes, Total 40minutes Secondary antibody: Polyclonal goat anti-mouse immunoglobulins/HRP (Dako), 1/7500 dilutionECL (GE Healthcare) was used for chemiluminescence reaction. Exposed on X ray film B) Phospho-p44/42 MAPK (Thr202/Tyr204) (E10) Mouse mAb（Cell Signaling） 1/2000 dilution 4℃ overnight reaction is recommended by the manufacturer Traditional Method: Primary antibody 16 hours Western Q CirculatedPulse Method: 40 minutes exposure 2.5 minutes exposure 10 minutes Traditional Method: Blocking 1hour (5% skim milk), Primary antibody16 hours, Secondary antibody 1hour, Washing total 60 minutes, Total18 hours Western Q Standard Protocol: Blocking 5 minutes (0.5% skim milk), Primary antibody 15minutes, Secondary antibody 15minutes,Washing 5 minutes, Total 40minutes Secondary antibody: Polyclonal goat anti-mouse immunoglobulins/HRP (Dako), 1/7500dilution ECL Plus (GE Healthcare) was used for chemiluminescence reaction. Exposed on X ray film C) Phospho-Akt (Ser473) (Cell Signaling) 1/1000 dilution 4℃ overnight reaction is recommended by the manufacturer Traditional Method: Primary antibody 16 hours Western Q Circulated Pulse Method: 85 minutes exposure: 5 minutes exposure: 15 minutes Traditional Method: Blocking 1hour (5% skim milk), Primary antibody 16 hours ( 4℃ ), Secondaryantibody 1hour, Washing total 60 minutes, Total 18 hours Western Q modified protocol: Blocking 5 minutes (0.5% skim milk), Primary antibody 60 minutes, Secondary antibody 15minutes, Washing 5 minutes, Total 85minutes Secondary antibody: Polyclonal swine anti-rabbit IgG/HRP (Dako), 1/7500dilution ECL Plus (GE Healthcare) was used for chemiluminescence reaction. Exposed on X ray film Reaction speed by Western Q (Circulated Pulse Method) is several todozen times higher than one by traditional shaking method.☞ Protocol adjustment such as increasing time or raising concentration may be necessary for immunostaining which requires overnight reaction by traditional method because of antibodies or samples 簡単操作 ４０分 標準プロトコール（循環パルス法）で４０分の操作で免疫染色が完了します。抗体濃度・プロトコールによっては３０分程度に短縮可能です。振とうでオーバーナイトが必要な抗体では、４０分以上かかることがあります。 用途に合わせた２種類のプロトコール 高感度ハイクオリティを実現する「循環パルス法」と、複数の抗体反応を簡易的に行うための「インキュベーション法」の２種類の基本プロトコールを準備しました。 ハイクオリティな結果 循環パルス法では最適化されたフローコントロールにより、高い定量性・再現性・感度を実現します。 → 詳細は データシート をご参照ください。 抗体濃度の最適化不要 抗体濃度は基本的に従来法と同様で結構です。多くの場合、抗体メーカーの推奨濃度で反応できます。 必要な溶液量はワイドゲル（140×80mm）15ml、ミニゲル（80×80mm）8ml 、80×40mmでは4mlとなります。 ゲルに合わせたコンパクトボディ 狭いスペースでも利用でき、移動も楽に行えます。 製品リーフレット（PDF） のダウンロード ご利用者の感想 もご覧いただけます。 Click to download Leaflet on Western Q and Datasheet on Western Q 従来法と同等以上のイメージ / 高い定量性・再現性・感度 従来法 240 分 Western Q 循環パルス法(A) 40 分 Western Q 循環パルス法(B) 40 分 lane1～5： ヒト培養細胞由来全タンパクを10μgから0.625μgまで2倍希釈系列をブロッティング ブロッキング： 従来法は5%スキムミルク、Western Q 循環パルス法は0.5%スキムミルク使用 一次抗体： Mouse monoclonal β-Actin (C4) （Santa Cruz）、1/3000希釈 二次抗体： Polyclonal goat anti-mouse immunogloblins/HRP (Dako)、1/7500希釈 ECL（GE Healthcare）で反応させた後、X線フィルムに40秒間露光 　同じ条件での比較 Western Q 循環パルス法はA, B 2回の反復実験 Western Q® を用いた高速免疫染色の原理 Western Q を用いた方法では、抗体溶液をメンブレンの微細孔内部に継続的に流し通過させることにより抗原と抗体の会合を促進します。さらにパルスフローにより分子の安定的な結合を促進し、短時間で高いシグナル強度を実現します。ポンプにより溶液を循環させるため一定量の抗体溶液で抗原抗体反応を効率よく行うことが可能になりました。 　循環パルス法を用いた標準操作 メンブレンをセットし、メンブレンカバーを重ね合わせます。 ブロッキング溶液 8ml をメンブレン上に満たし、5 分間循環させた後、排出。 一次抗体溶液を 8ml メンブレン上に満たし、15 分間パルスフローで循環させた後、排出。 二次抗体溶液 8ml を加え、15分間パルスフローで循環させた後、排出。 洗浄ユニットをセットし、洗浄溶液を 100ml 加え、すぐ排出。（約5分） メンブレンを取り出し、軽く洗浄溶液で濯ぎ、化学発光試薬で検出。 簡単操作、４０分！ Western Q® 仕様 型式 WTQ101 （ミニゲル対応） WTQ102 （ワイドゲル対応） 外形寸法（チューブ固定具装着時） 150(W)×150(D)×157(H) mm 190(W)×150(D)×157(H) mm 重量 1.6 kg 1.7 kg 最大メンブレンサイズ 90×90 mm 140×90 mm 必要抗体溶液量 8ml （90×90mmメンブレン） 15ml （140×90mmメンブレン） ポンプ速度 5～40ml/分

T-Pro高靈敏度picogram與fetogram冷光試劑 LumiFast Chemiluminescence Detection Kit, 貨號#JT96-K001S

西方轉漬分析-ECL【市售ECL主要市場比較】

 

 

1. PerkinElmer

市面上大部份ECL的等級是nanogram，PerkinElmer Lightning plus靈敏度為1-10 picogram，包裝規格如下: 170mlx4 特價~7000元 (~10元/ml)

Western Blot Chemiluminescence Reagent Plus

(~10元/ml)

目錄號碼	包裝	可使用面積
NEL104	2 x 170 ml	2,500 cm2 membrane
NEL105	4 x170 ml	5,000 cm2 membrane

2. Pierce

SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate

靈敏度為picogram 250mlx2 特價~7000元 (~14元/ml) 第二件半價 (~10元/ml)SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate

(~10~14元/ml)

T-PRO新一代高靈敏度冷光試劑ECL

(一) fetagram ECL，靈敏度接近fg (靈敏度接近millipore ECL)

200mlx2 特價3500元

(一) Picogram ECL，靈敏度接近pg (靈敏度高於Pierce ECL, 與PerkinElmer )

200mlx2 特價2500元

(~6.25元/ml)-->picogram等級

 

(~8.75元/ml)-->fetogram等級

T-Pro LumiFast Chemiluminescence Detection Kit, 貨號#JT96-K001S

400ml特價2500

T-Pro LumiFast Plus Chemiluminescence Detection Kit, 貨號#JT96-K002S 400ml特價3500

冷光試劑介紹:

T-Pro LumiFast Chemiluminescence Detection Kit & T-Pro LumiFast Plus Chemiluminescence Detection Kit 為一方便用於偵測直接或間接帶有HRP的Western blotting，Southern 或 Northern化學發光之試劑套組。在有過氧化氫存在的情形下，Horseradish peroxidase (HRP)會催化環狀二酰基酰肼(cyclic diacylhydrazides)的氧化，像是發光胺(luminol)。氧化當下，發光胺(luminol)的中間產物處於激發態，此產物藉由發光的方式衰退為基態。強化劑可增強發光的能量。利用此方法可以藉由直接或間接標定有HRP的抗體/鏈親和素(streptavidin)進而偵測特殊抗原或是核酸序列。

操作流程：

1. 將T-Pro LumiFast Chemiluminescence Detection Kit & T-Pro LumiFast Plus Chemiluminescence Detection Kit 中的試劑A及試劑B等體積混合至足夠蓋過membrane的使用量(平均用量最少為0.1ml/cm²)。於室溫使此混合試劑均勻混合作用1-2分鐘。

2. 將membrane上過量的緩衝液倒掉，但要保持轉漬膜的濕潤。加入步驟1混合好的試劑於轉漬膜上，在室溫下作用1-2分鐘。

3. 將步驟2過多的混合試劑倒掉，且將轉漬膜置於兩層保鮮膜中間或用兩片透明塑膠片密封，注意不可以有氣泡，並將轉漬膜吸附蛋白正面朝上，同時轉漬膜請勿過濕。

4. 將步驟3轉漬膜置入底片夾中。置入底片，要避光或是使用紅光。曝光約30至90秒。

5. 置入新的底片前，請先將原先片夾中的底片取出，並將底片放入顯影劑中。

6. 第二張底片的曝光時間可依據第一張的時間做調整。

7. 如果訊號過強，可在加入呈色劑15~30分鐘後再進行壓片，或作其他時間的調整。

注意事項：

1. 轉漬膜在接上一級抗體後須保持濕潤，不能乾掉。

2. 請在壓片前再配製化學發光試劑，配製量足夠覆蓋轉漬膜即可，勿將使用過混合試劑重複或混合使用。

3. 請使用乾淨微量吸管(Tip)並單一取用每種試劑，勿重複多次試用避免污染。

4. 除了取用底片、壓片曝光及洗片處理外，其他步驟可不必在暗室中操作。

5. 壓片後轉漬膜可經由T-Pro Western Blot Stripping Reagent (JB11-K002) 洗去原有抗體後，重複再次使用。

 

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HRP 呈色受質-3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine (TMB),SouthernBiotech, SBA TMB受質

HRP 呈色受質比較：

受質	DAB	4-CN	AEC	TMB
化學名	3,3-diaminobenzidine tetrahydrochloride	4-chloro-1-naphthol	3-amino-9-ethyl carbazol	3,3,5,5 tetramethylbenzidine
分子量	214.14	178.58	210.28	240.4
穩定性	好	一般	避光	好
靈敏度	250pg	1ng		100pg
背景	一般	低	高	高
終產物成像性	不能很好的成像	容易成像		容易成像
顏色	褐色	介於藍色與藍紫色之間 （可用於double-staining）	棕紅色	藍紫色
毒性	有（疑有治癌作用）	無	有	無

TMB成色劑資料 可用再多種轉漬膜上 價格為 100m l NT$ 3500- ( 一組 ) 5組以上 NT$ 3000- (單組價)

3, 3’ ,5, 5’ -tetramethylbenzidine (TMB) is a peroxidase substrate which produces a stable, insoluble, dark blue precipitate at the reaction site with minimal background. It is ideal for many immunoblotting procedures and can significantly increase the detection limits of assays on a variety of membranes. TMB is supplied as a ready to use single component system. 【供應廠商】萊恩生物科技有限公司   【公司電話】04-2523-9639   【業務專員】陳俊豪 0937-229803   【電子信箱】biolion0819@gmail.com